DETERMINACIÓN
DE LA HEMOGLOBINA
Objetivo:
Determinar cuántos
gr de hemoglobina (Ha) hay en toda la sangre circulante, para tener un diagnóstico
clínico ya que se pueden variar diversas enfermedades debido a un valor anormal
de Hemoglobina.
Fundamento:
La
hemoglobina es una proteína conjugada que sirve para el transporte de oxígeno y
dióxido de carbono. La masa total de eritrocitos de un adulto contiene unos
600gr. De hemoglobina capaces de transportar 800ml de oxígeno.
Una
molécula de hemoglobina consta de 2 pares de cadenas polipépticas (unión de
aminoácidos) (globina) y 4 grupos proteicos HEM que contienen cada uno un átomo
de hierro en estado ferroso. Cada punto HEM se localiza en una zona determinada
de una de las cadenas de polipépticos. Localizando cerca la superficie de la
molécula, el HEM se combina de forma reversible con una molécula de oxígeno y
dióxido de carbono. Este grupo HEM es el responsable del color rojo de la
hemoglobina (Hb).
La parte
proteica o globina tiene 4 cadenas polipeptídicas que se denominan con las
letras α, β, γ, δ. Existe una cadena más la ε que está presente durante los 3 primeros meses de vida se diferencian
unas de las otras en el numero o posición (de los aminoácidos de los que están
compuestas). Por lo tanto existen varios tipos de Hb. en el ser humano que se
pueden encontrar (Hb A, Hb A1, Hb F, Hb Gower)
Las
distintas Hb tienen espectros de absorción características a las que determina
en un espectrofotómetro. La identificación de diferentes formas de la Hb con la
determinación de sus espectros de absorción puede hacerse de una manera
sencilla
Material y Equipo:
· Un espectrofotómetro.
· Una pipeta de vidrio graduada de 5 ml
· Tubos de ensayo.
· Cubetas cuadradas.
· Gradilla
· Gasa
Reactivos:
· Reactivo Drabkin
Técnica:
1.-En un
tubo de 13 x 100 colocar exactamente 5 ml de reactivo de Drabkin, marcarlo como
problema (P).
2.-Obtener
5 ml de sangre venosa con anticoagulante (EDTA).
3.-Con una
pipeta automática o pipeta de Shali se toma exactamente 0,02 ml (20 µL) de
sangre total, limpiar luego la punta de la pipeta.
4.-La
sangre tomada del tubo con EDTA se vierte en el tubo que contenga reactivo de
Drabkin. Se enjuaga 3 veces y se mezcla.
5.- Mezcle
la solución de Drabkin con la sangre por inversión y con mucha precaución
6.-Dejar en
reposo de 5 a 10 minutos para que se
efectúe la reacción.
7.-Después
de ese tiempo se llenan las cubetas y se procede la lectura.
8.-Leer en
absorbancia con filtro verde a 540 nm llevando a cero el fotómetro con agua
destilada / Drabkin.
Resultado:
El
espectrofotómetro nos dio como resultado .353 y después de hacer los cálculos correspondientes
el resultado fue de 15.5. La muestra fue de una mujer por lo cual se encuentra
dentro de los valores normales.
Observaciones:
Este es uno
de los análisis más fáciles de realizar ya que la máquina hace todo por
nosotros
Conclusiones:
Existen
varios factores para determinar cuándo y con qué frecuencia se pueden realizar
los exámenes. Se puede sugerir un examen o llegar a ser necesario cuando
aparecen ciertos signos o síntomas.
