Práctica 4: Técnica de Ritchie

Fundamento
Se basa en la concentración de los quistes y huevos por sedimentación mediante la centrifugación, con la ayuda de formol y éter para separar y visualizar los elementos parasitarios.
Unas ventajas que tiene ése método es concentrar y no deformar las formas parasitarias, permite el transporte y almacenamiento de la materia fecal procesada antes de ser examinada, se usa cuando se necesita una técnica para la evaluación de tratamiento y determinación de frecuencia.

Material y equipo
Centrifuga
Tubos de ensaye cónicos de 15 ml
Gasa cortada en cuadros
Embudos de polietileno
Vasos de precipitado de 5 ml
Aplicadores de madera
Pipetas Pasteur con bulbo
Portaobjetos de 26 x 76 mm
Cubreobjetos de 22 x 22 mm
Microscopio

Solución salina isotónica
Solución de formaldehido al 10%
Éter

Método
a) Con el aplicador de madera se coloca aproximadamente 1 gr. de la materia fecal en el vaso de precipitados, se añaden 10 ml de solución salina y se homogeniza

b) Se filtra la suspensión a través de la gasa colocada en el embudo, recogiendo el filtrado en el tubo cónico

c) Se centrifuga la suspensión durante 2 minutos a 2000 rpm

d) Se decanta el sobrante y se resuspende el sedimento con solución salina, centrifugando, decantando y resuspendiendo 2 veces mas

e) Al último sedimento se agregan 10 ml de solución de formaldehído al 10% se mezcla y se deja reposar durante 10 minutos

f) Se añaden después 5 ml de éter, se tapan los tubos con tapones de caucho y se agitan enérgicamente durante 30 segundos.

g) Se centrifuga durante 2 minutos a 2000 rpm

h) Después de centrifugar se observan 4 capas:
* Éter e la superficial
*Un tapón de restos fecales
*Formaldehído
*Sedimento en el fondo del tubo, conteniendo los elementos parasitarios

i) Se decanta el sobrante

j) Se introduce la pipeta Pasteur hasta el sedimento, se extrae con cuidado una gota del sedimento y se coloca en un portaobjetos

k) Se le añade una gota de lugol y con uno de los ángulos del cubreobjetos se homogeniza, cubriéndolo con el mismo

l) Se observa la preparación en el microscopio con objetivos de 10X y 40X