Determinación de Hb

DETERMINACIÓN DE LA HEMOGLOBINA

Objetivo:

Determinar cuántos gr de hemoglobina (Ha) hay en toda la sangre circulante, para tener un diagnóstico clínico ya que se pueden variar diversas enfermedades debido a un valor anormal de Hemoglobina.

Fundamento:

La hemoglobina es una proteína conjugada que sirve para el transporte de oxígeno y dióxido de carbono. La masa total de eritrocitos de un adulto contiene unos 600gr. De hemoglobina capaces de transportar 800ml de oxígeno.

Una molécula de hemoglobina consta de 2 pares de cadenas polipépticas (unión de aminoácidos) (globina) y 4 grupos proteicos HEM que contienen cada uno un átomo de hierro en estado ferroso. Cada punto HEM se localiza en una zona determinada de una de las cadenas de polipépticos. Localizando cerca la superficie de la molécula, el HEM se combina de forma reversible con una molécula de oxígeno y dióxido de carbono. Este grupo HEM es el responsable del color rojo de la hemoglobina (Hb).

La parte proteica o globina tiene 4 cadenas polipeptídicas que se denominan con las letras α, β, γ, δ. Existe una cadena más la ε que está presente durante los 3 primeros meses de vida se diferencian unas de las otras en el numero o posición (de los aminoácidos de los que están compuestas). Por lo tanto existen varios tipos de Hb. en el ser humano que se pueden encontrar (Hb A, Hb A1, Hb F, Hb Gower)

Las distintas Hb tienen espectros de absorción características a las que determina en un espectrofotómetro. La identificación de diferentes formas de la Hb con la determinación de sus espectros de absorción puede hacerse de una manera sencilla 

Material y Equipo:

·         Un espectrofotómetro.

·          Una pipeta de vidrio graduada de 5 ml

·          Tubos de ensayo.

·         Cubetas cuadradas.

·         Gradilla

·         Gasa

Reactivos:

·         Reactivo Drabkin

Técnica:

1.-En un tubo de 13 x 100 colocar exactamente 5 ml de reactivo de Drabkin, marcarlo como problema (P).

2.-Obtener 5 ml de sangre venosa con anticoagulante (EDTA).

3.-Con una pipeta automática o pipeta de Shali se toma exactamente 0,02 ml (20 µL) de sangre total, limpiar luego la punta de la pipeta.

4.-La sangre tomada del tubo con EDTA se vierte en el tubo que contenga reactivo de Drabkin. Se enjuaga 3 veces y se mezcla.

5.- Mezcle la solución de Drabkin con la sangre por inversión y con mucha precaución

6.-Dejar en reposo de 5 a 10 minutos para que se  efectúe la reacción.

7.-Después de ese tiempo se llenan las cubetas y se procede la lectura.

8.-Leer en absorbancia con filtro verde a 540 nm llevando a cero el fotómetro con agua destilada / Drabkin.

Resultado:

El espectrofotómetro nos dio como resultado .353 y después de hacer los cálculos correspondientes el resultado fue de 15.5. La muestra fue de una mujer por lo cual se encuentra dentro de los valores normales.

Observaciones:

Este es uno de los análisis más fáciles de realizar ya que la máquina hace todo por nosotros

Conclusiones:

Existen varios factores para determinar cuándo y con qué frecuencia se pueden realizar los exámenes. Se puede sugerir un examen o llegar a ser necesario cuando aparecen ciertos signos o síntomas.