Prueba de VIH

La prueba de VIH  es un ensayo individual para la detección de anticuerpos para el virus de la inmunodeficiencia humana tipo 1 y 2 en suero, plasma o sangre total.

PRINCIPIOS DEL PROCEDIMIENTO

Las proteínas recombinantes representando las regiones de las proteínas de la cubierta del VIH-1 Y VIH-2, la glicoproteína gp41, gp120 (VIH-1), y la glicoproteína gp36 (VIH-2) respectivamente so inmovilizadas en la región de la prueba de la tira de nitrocelulosa. Estas proteínas también se unen al aro coloidal  y se impregnan por debajo de la región de prueba del  cartucho. Una banda delgada de la  membrana de nitrocelulosa también se sensibiliza como una región control. 

Durante la prueba se aplican dos gotas de suero, plasma o sangra total al área de muestra, seguido de dos gotas de buffer de lavado y se deja que reaccionen. Loas anticuerpos IgG, específicos para las proteínas recombinantes del VIH-1 y VIH-2, reaccionaran con los antígenos unidos a las partículas de oro coloidal. El complejo partículas de oro coloidal-anticuerpos se mueve cromatográficamente a través de la membrana a las regiones de prueba y control de cartucho de prueba. 

Una reacción positiva se visualiza por una banda de color rosa/púrpura en la región de prueba del cartucho.

Una reacción negativa ocurre en la ausencia de anticuerpos inmunoglobulina humanos para VIH en la muestra analizada. Consecuentemente se desarrolla una banda no detectable visualmente en la región de prueba del cartucho. 

Un exceso de conjugado forma una segunda banda rosa/roja en la región control del cartucho. La aparición de esta banda indica el adecuado funcionamiento de los reactivos del equipo.

MATERIAL 

1.     Cartuchos de Prueba

2.      Reactivo de Lavado

3.      Pipetas desechables

4.      Inserto

5.      Cronómetro

6.      Equipo de Toma de muestra de sangre

ALMACENAMIENTO Y ESTABILIDAD

-    El equipo de prueba de VIH y la solución de lavado se puede almacenar de 275-300K (2-27°C).

-    Los componentes del equipo no se deben de utilizar después de su fecha de caducidad.

-    No fume, beba  o coma en áreas en las cueles se estén manipulando las muestras.

-    Deseche todas las muestras, pipetas y cartuchos utilizados ya que son capaces de transmitir infección. Los métodos de desecho de preferencia son esterilizando en autoclave a 121°C por un mínimo de 60min. O por incineración.

-    Cuando se elimine el buffer de lavado evite su contacto con algún ácido.

-    Todos los derrames se deben de limpiar completamente utilizando un desinfectante adecuado como el hipoclorito de sodio.

-    Utilice una pipeta desechable y un cartucho por cada muestra probada.

-    Los controles proporcionados se han certificado libres de virus. Como con todos los ensayos de screening cualquier resultado se debe de considerar presuntivo hasta que se haya realizado un ensayo confirmatorio de acuerdo a las prácticas locales o guías de la OMS.

RECOLECCION Y ALMACENAMIENTO DE LA MUSTRA

Se puede utilizar sangre total, suero o plasma.

·         Sangre Total: Si se usa una lanceta para punción capilar, las gotas de sangre se deben de tomar de la punta del dedo utilizada la pipeta proporcionada en el equipo y a partir de esta pipeta colocar las gotas en el cartucho. Las gotas de sangre no se deben colocar directamente de la punta del dedo al cartucho ya que su volumen puede variar.

NOTA IMPORTANTE: Las muestras de sangre total (MUESTRAS FRESCAS) se deben usar dentro de los diez minutos después de su toma para un funcionamiento óptimo del cartucho.

-      Si la muestra se ha comenzado a coagular no vuelva a mezclar antes de realizar la prueba. En tales casos, se debe de pipetear el suero claro del coágulo y utilizarlo para el análisis.

-      Si se ha utilizado una muestra de sangre con anticoagulante, la sangre total se puede colocar directamente en los cartuchos usando la pipeta proporcionada. Si la prueba no se va a llevar a cabo inmediatamente, las muestras se deben de almacenar de 275-281k (2-8°C) máximo tres días o preferentemente las muestras se deben de centrifugar y conservar el plasma para pruebas futuras.

·     Suero o Plasma: El suero o plasma se puede mantener de 275-281k (2-8°C) por tres días. Las muestras se deben de congelar para el caso de almacenamientos más prolongados (no más de cinco días). Evite repetir el congelamiento-descongelamiento de las muestras.

NOTA IMPORTANTE: De preferencia utilice muestras frescas para realizar la prueba.

PROCEDIMIENTO

Si cualquier muestra/reactivo se ha almacenado en refrigeración, permita que se atemperen 20min. A temperatura ambiente.Marque la prueba con la información apropiada del paciente.Utilizando una de las pipetas proporcionadas tome la muestra (suero/plasma/sangre total). Colocando la pipeta sobre el área de muestra adicione dos gotas de muestra (aproximadamente 60 ЧL) cuidadosamente.
Adicione dos gotas (aproximada- mente 60 ЧL) del reactivo de lavado al área de la muestra

Permita que transcurran exactamente 10min. Para que la reacción ocurra. El resultado se debe de leer exactamente al final de los 10min. Del tiempo de incubación. Los resultados son estables aproximadamente durante 5-10min.

INTERPRETACION DE RESULTADOS

Positivo: Una línea de cualquier intensidad en el área de prueba, una segunda línea en el área de control indica un resultado positivo.
 Negativo: Una línea en el área de control únicamente indica un resultado negativo.
 Invalido: Ausencia de una línea en el área de control. La prueba se debe de repetir con un cartucho nuevo independientemente de que aparezca un alinea en el área de prueba.

RESULTADOS

Puesto a que se observa una línea de color rasa/roja; tanto en la región de prueba como en la región de control en el cartucho, el resultado es positivo

LIMITACIONES

-      El procedimiento de prueba de VIH y la interpretación de los resultados se deben de seguir al pie de la letra para la detección de anticuerpos VIH en suero, plasma o sangre total.

-      La  prueba de VIH esta hecha para probar únicamente muestras sin diluir. Las muestras no se deben de diluir antes de realizar la prueba.

-      Los individuos inmunosuprimidos o inmunocomprometidos infectados con VIH-1 o VIH-2 pueden no producir anticuerpos para el virus. Probar con cualquier equipo diseñado para detectar anticuerpos puede dar resultados negativos y podrían no ser un método de prueba adecuado para teles pacientes.

-      Los niños pueden recibir anticuerpos de la madre infectada o puede ser que no produzcan anticuerpos en respuesta a una infección. Por lo tanto es necesario tener un cuidado extremo en la interpretación de sus resultados.

-      El SIDA y el ARC son síndromes clínicos y sus diagnósticos pueden establecerse clínicamente. Los resultados de  la  prueba de VIH por si solos no se pueden utilizar para diagnosticar SIDA. Un resultado negativo no excluye de la posibilidad de exposición al VIH o infección con VIH.

 
 

CONCLUSIÓN

La práctica es bastante sencilla, por así decirlo, sin embargo tiene una gran resposabilidad y debe de realizarse con extremo cuidado, al ser un virus tan riesgoso y de graves consecuencias se deben de tomar las mayores precauciones a la hora de su realización y llevarla acabo con la mayor seriedad posible

Prueba de Rumpel Lee

Prueba de lazo o torniquete

Introducción:

Consiste en someter el antebrazo del paciente a una presión intermedia entre la sistólica y la diastólica durante 5 minutos. Tras la retirada del manguito inflable del tensiómetro, como para medir la T.A.  y esperar a que la piel recupere su estado relajado se observa la zona presionada. El conteo de petequias producidas por la rotura capilar en un área de unos 10 cm² superior a 30 da positivo en el signo de Rumpel-Leede.

Normalmente no debe de producirse mas de 5 petequias por debajo de la comprensión, más de 10 petequias y sobre todo extendidas mas alla del cuarto superior del antebrazo es patológico.   

Tiene como finalidad determinar la fragilidad de las paredes capilares, estimar la tendencia a la hemorragia y ayuda a reconocer la trombocitopenia.

Valores Normales:

0-10 = 1+

10-20 = 2+

20-50 = 3+

50 o más petequias = 4+

Los valores aumentados pueden indicar coagulación intravascular difusa. disminución del fibrinogeno, disminución de la protombina, deficiencia del factor VII, trombocitopenia, tromboastenia, deficiencia de vitamina K. Y puede estar asociado a afecciones no relacionados con trastornos de coagulación como: escarlatina, hipertensión, diabetes, gripe, sarampión, escorbuto.

 

Resultados:

 

Aparecieron dos petequias en el área marcada, lo que está dentro de los valores normales, lo que indica que está en buen estado de salud 

 

Comentario:

 

La práctica nos resultó una experiencia un tanto divertida y fascinante, al ver como la mano de nuestra compañera perdía  color con rapidez, las petequias aparecieron un poco después de haber retirado la presión 

 

 

Retracción del coágulo

OBJETIVO:

Al término de la práctica el alumno será capaz de realizar e interpretar la prueba de R.C

INTRODUCCIÓN:

Puesto que el coágulo de fribrina encierra los elementos organizados (celulares) de la sangre (in vitro e in vivo) el volumen de los glóbulos rojos establece el límite inferior de la retracción de la fibrina. Por lo tanto, siendo normales los demás factores, el coágulo se retrae tanto más cuanto menor es el hematocrito. La retracción es directamente proporcional al número de plaquetas, e inversamente al hematocrito. Cuando las fibrinolinas son muy activas la fibrina puede disolverse casi tan rápidamente como se forma, y la retracción del coágulo se modifica en los transtornos de este tipo: choque, quemaduras etc.

Mide la cantidad de fibrina formada y su retracción; así como al número de función de las plaquetas, pues poseen una proteína similar a la actomiosina, que produce la retracción del coágulo.

MATERIAL:

• Tubos de ensaye para centrifugar
• Alambre de 1 mm. De grosor
• Baño maría de 37°c
• Equipo de venopunción

TECNICA:

1. Se pone en un tubo de centrifuga graduado de 5 ml de sangre venosa recién obtenida. Se lleva el alambre al fondo del tubo.
2. Se pone el tubo en el alambre, de un baño de agua a 37°c en donde se deja 1 hr. Después de la formación del coágulo sin tocarlo.
3. Se saca el alambre cuidadosamente y se deja escurrir dentro del tubo el coágulo unido al alambre durante 1 a 2 min.
4. Se lee el volumen del líquido que quedo en el tubo. El resultado es expresar como un porcentaje del volumen inicial de 5 ml.

VALORES NORMALES:

Entre 48 y 64 por ciento.

RESULTADO:

Muestra 1: 50% y muestra 2: 46%

COMENTARIO:

La prueba es relativamente sencilla, a excepción de que se emplea bastante tiempo en ella, pero en cuanto a cuestión de elaboración es muy fácil. El baño maría es el que se encarga de la mayor parte del trabajo, así que cuando se saca la muestra de ahí solo resta medir el líquido.

Rosa de Bengala

INTRODUCCIÓN:

Se utiliza un antígeno de Brucella abortus biotipo teñido con Rosa de Bengala a un pH de 3.65 +/- 0.05 para la detección de aglutininas especificas de Brucella. Esta prueba puede ser utilizada para un diagnostico temprano.

MATERIAL:
Antígeno Rosa de Bengala

Placa de prueba

Pipetas  desechables

El gotero incluido proporciona una gota de 30-40 ul.

Cronometro

Muestra.

PROCEDIMIENTO:

1. Llevar a temperatura ambiente el reactivo controles y muestras del suero.

2. Utilizando la pipeta automática adiciones 30ul de la muestra del paciente e un circulo de la placa.

3. Mezcle suavemente en Antígeno de Rosa de Bengala hasta que se encuentre totalmente homogéneo después coloque 30ul en la placa de prueba en el mismo circulo donde se coloco la muestra del paciente, mezcle ambas con un aplicador( usar un aplicador diferente para cada muestra de paciente y controles.

4. Agitar la placa con movimiento rotatorios por 4 minutos.

5. Con la ayuda de una fuente de luz directa lea el resultado.

RESULTADO:

 

Negativo

CONCLUSIÓN:

 

Es un práctica bastante sencilla y rápida de realizar y muy útil para detectar la Brucella de manera fácil

Tiempo de Sangrado

MÉTODO DE DUKE

OBJETIVO

Que al termino de la practica realice el tiempo de sangrado por cualquier de los dos métodos existentes.

INTRODUCCIÓN

Un tiempo de sangrado normal indica una retracción normal de los capilares y la existencia de un numero suficiente de plaquetas, con actividad normal.

La metamorfosis viscosa normal depende de un buen mecanismo extrinseco de producción de tromboplastina, por lo tanto, el tiempo de sangrado se alarga en la insuficiencia del factor  Vll. El tiempo de sangrado aumenta en forma caracteristica en la purpura  trombocitopenica.

MATERIAL

Lanceta estéril 

Torundas alcoholadas 

Reloj cronometro

Papel filtro

TÉCNICA

1.- Con una lanceta estéril, se practica en el borde inferior del lóbulo de la oreja una punción de 3mm. de profundidad. Se pone en marca el cronometro. El borde debe ser profundo, y no debe de abarcar venas visibles.

2.- A intervalos de medio minuto, se aplica cuidadosamente, sobre la gota de sangre el borde de un pequeño papel filtro, cuidando de no tocar la piel. Esta maniobra por objeto es impedir que se forme coagule la gota de sangre sobre la herida ,pues los tiempos de sangrado resultaran anormalmente bajos.

3.- Utilizando una nueva zona de papel filtro para cada secado de medio minuto, puede tener un registro conveniente del tiempo total (tiempo en minutos = numero de gotas divididas entre dos ) se toma como punto final al momento en el cual el papel filtro ya no absorbe sangre.

TIEMPO DE SANGRADO NORMAL CON EL MÉTODO DE DUKE:

De uno a tres minutos (si embargo, puedo ser a veces hasta cinco minutos en sujetos normales).

RESULTADO:

Método de DUKE 1:33 minutos.

EVIDENCIA:

MÉTODO DE IVY

TÉCNICA: 

1. Se coloca alrededor del brazo un manguito de esfindonometro con el cual se ejerce precio de 40 mm. De Hg. Que debe permanecer aquel durante toda la prueba.

2. Utilizando una lanceta estéril se hace a intervalos de cortos tres punciones (entre 2.5 y 3.0 mm de profundidad), a lo  largo de la cara flexora (interna) el antebrazo, evitando las venas visibles. Se pone en marcha el cronometro.

3.- A intervalos  de medio minuto , utilizando papel filtro se seca cuidadosamente cada gota de sangre en la misma forma que para el método  de DUKE, el punto final es el mismo.

TIEMPO NORMAL DE SANGRADO EN EL MÉTODO DE IVY.

ENTRE 2 Y 6 minutos (máximo de 7 minutos).

NOTA: el tiempo de sangrado representa sencilla y útil (aunque algo imprecisa) de la eficacia de las funciones capilares y de plaquetas  en la hemostasia. Es preferible el método de IVY al de DUKE,pues las condiciones son mas contantes y se realizan en realidad 3 pruebas.

RESULTADO:

Método de IVY 3:48 minutos.

CONCLUSIÓN:

Es una práctica bastante sencilla de realizar, aunque en el metodo de Ivy nos constó un poco de trabajo mantener la presión estable, sin embargo pudimos realizarla con éxito

VDRL

Treponema pallidum, la bacteria que causa la sífilis, una enfermedad que generalmente se transmite por vía sexual.

Su diagnóstico puede ser serológico, con lo que se pueden determinar dos clases de anticuerpos:

1.    Tipo “cardiolipina”.- No treponema e inespecíficos

2.    Antitreponemas específicos

La prueba realizada Venereal Disease Research Laboratory VDRL se le conoce como una prueba para sífilis no-treponémica. Es parte de la exploración inicial de la sífilis e iniciar un tratamiento. Con  el método cualitativo empleando la  placa presenta floculación, si se presenta el caso se lleva a cabo el método cuantitativo con el o los sueros positivos.

También se emplea en el cuidado prenatal del embarazo, así como parte de los estudios de laboratorio prenatales.

MATERIAL:

o    Placa cóncava

o    Puntillas

o    Aguja No. 21 sin bisel

o    Cronómetro

o    Pipeta semiautomática

o    Microscopio

o    Antígeno VDRL y los Sueros de Controles (almacenados 2-8°C)

1. Depositar 0.05 ml. de suero problema en un anillo de la placa cóncava.
2. En otro anillo colocar una gota de suero control positivo y en el anillo siguiente una gota
de suero control negativo, extendiendo dentro de los mismos.
3. Añadir una gota del antígeno en suspensión previamente resuspendido en cada muestra
con la aguja N.21
4. Colocar la placa sobre un agitador mecánico a 180 rpm durante 4 min.
Las pruebas que se realizan en un clima extremadamente seco pueden evaporarse, por lo tanto
la paca se cubre con la tapa de una caja Petri humedecida.

Si el examen es positivo, el siguiente paso es confirmar los resultados con examen FTA-ABS, que es un examen más específico para la sífilis.

La capacidad del examen VDRL para detectar sífilis depende de la etapa de la enfermedad. La sensibilidad del examen para detectar la sífilis se acerca al 100% durante las etapas intermedias y es menos sensible durante las etapas más tempranas y tardías.

Las siguientes afecciones pueden provocar un examen falso positivo:

·  VIH

·  Enfermedad de Lyme

·  Ciertos tipos de neumonía

·  Malaria

·  Lupus eritematoso sistémico

Si las pruebas hubieran resultado positivas, se aplicaría el siguiente método

Método cuantitativo

1. Seleccionar los sueros positivos obtenidos en la prueba cualitativa.

2. Colocar en una gradilla 6 tubos y numerarlos.

3. Agregar a cada uno 0.5 ml. de solución salina al 9%.

4. Depositar 0.5 ml. de suero al tubo 1 y mezclar.

5. Pasar 0.5 ml. del tubo 1 al tubo 2 mezclar.

6. Pasar 0.5 ml. del tubo 2 al tubo 3 mezclar

7. Continuar con este proceso hasta el tubo 6.

8. Depositar 0.05 ml. de cada una de las diluciones sobre los diferentes anillos de la placa
cóncava.

9. Añadir una gota del antígeno en suspensión estabilizado (VDRL) utilizando la aguja No.21 sin
bisel a cada dilución.

10. Colocar la placa sobre un agitador mecánico a 180 rpm. Durante 4 min.

11. Leer al microscopio con objetivo seco débil 10x.

Resultados e interpretación

El título del suero problema será la última dilución que presente un resultado positivo. Ejemplo:

Si se presenta floculación hasta el tubo 3 – dilución 1:8, por lo tanto el título será 1:8.

Nota:
1.Sueros extremadamente turbios o hemolizados son insatisfactorios para la prueba.
2. Sueros débiles positivos y fuertes evidencias clínicas de la enfermedad es conveniente 
efectuar la prueba cuantitativa, ya que ocasionalmente pueden presentar el fenómeno de 
prozona.
3. Si la lectura del resultado no se realiza inmediatamente después de los 4 min. Puede secarse
la reacción y dificultad en la interpretación.
4. El antígeno en suspensión debe estar a temperatura ambiente antes de ser utilizado.

Conclusiones

Esta prueba cualitativa VDRL nos permite identificar a los pacientes con sífilis, enfermedad producida por la bacteria Treponema pallidum; se trata de una prueba rápida y certera que permite el inicio de un tratamiento eficaz evitando que avance y pueda ser controlada satisfactoriamente. En este caso, los resultados fueron negativos en ambas pruebas, por lo cual no hubo necesidad de utilizar el método cuntitativo.