Gonadotropina Corionica Humana

INTRODUCCIÓN:

La hCG es una hormona secretada por la placenta de la mujer embarazada que aparece relativamente pronto en sangre y orina después de la implantación del embrión fecundado. Puede ser detectada en orina a partir del tercer día de la perdida del periodo menstrual y su concentración sigue aumentando hasta alcanzar niveles muy altos después de las 10 semanas de gestación.

 

MATERIAL:

 

• Agitador
• Pipeta
• Placa de reacción
• Reactivo de látex

 

PROCEDIMIENTO:

1. Atemperar los reactivos y las muestras a temperatura ambiente la sensibilidad del ensayo disminuye a temperaturas bajas.
2. Depositar 100uL de la muestra a ensayar y una gota de cada uno de lso controles positivo y negativo, sobre círculos distintos de un porta.
3. Mezclar el reactivo de hCG- latex vigorosamente o con el agitador vortex antes de usar. Depositar una gota (50 uL) junto a cada una de las gotas anteriores.
4. Mezclar las gotas con un palillo, procurando extender la mezcla por toda la superficie interior del circulo. Emplear palillos distintos para cada muestra.
5. Situar el porta sobre un agitador rotatorio a 80-100 r.p.m durante 2 minutos.

RESULTADO:

La muestra resultó negativo, por lo tanto, la paciente no está embarazada

COMENTARIO:

 

La práctica en placa es muy sencilla de realizar, sin embargo ya no es de uso común, ya que las pruebas de embarazo en tira son mucho más utilizadas, tanto las caseras como las que se usan en los laboratorios

Biomoleculas

INTRODUCCIÓN:

Entre los compuestos fundamentales de la materia viva de las células encontramos los carbohidratos, lipidos y proteínas; por esta razón los alimentos que consumen todos los heterotofos incluido el ser humano, deben contener necesariamente estas macromoleculas.

Mediante el uso de pruebas quimicas sencillas se pueden identificar en los alimentos la presencia de estas macromoleculas.

OBJETIVO:

El alumno distinguirá en forma practica que alimentos contienes carbohidratos u cuales proteínas y grasas.

MATERIALES:

• 10 tubos de ensaye                                                                                Reactivo de Fehing
• 1 gradilla                                                                                           Ácido clorhidrico al 50
• 2 vasos de precipitados de 100 ml                                                           Lugol (solución alcohólica de yodo
• 1 agitados
• 1 mechero de bunsen                                                                                 Para proteinas 
• 2 pinzas para tubo de ensaye                                                                Reactivo de Biuret
• 1 gotero                                                                                         Ácido nítrico concentrado
• 1 pliego de papel estraza                                                Hidróxido de amonio concentrado

MUESTRA DE ALIMENTOS:

• Harinas (trigo)
• Frutas (manzana)
• Verduras (zanahoria)
• Carnes (hígado de pollo)
• Lácteos (queso)
• Semillas (haba)

Los alimentos deben estar hervidos a excepción de las frutas.

PROCEDIMIENTO:

 

REACCIONES PARA IDENTIFICAR CARBOHIDRATOS:

Prueba de lugol ( se utiliza para identificar almidones)

1.-Coloca una pequeña cantidad de la muestra en un tubo de ensayo

2.-Agrega dos gotas de lugol

3.-Observa el color que toma la muestra al reaccionar con el lugol

Si la muestra contiene almidón, con el lugol adquiera una coloración azul oscuro (prueba positiva) si no tomara el color ámbar del reactivo (prueba negativa)

los residuos contienen almidones y yoduros que de acuerdo con las normas ecológicas ECOL se pueden verter directamente al desagüe.

REACCIONES PARA IDENTIFICAR PROTEINAS:

Prueba de Biuret ( se utiliza para identificar proteínas y polipeptidos no menores de tres aminoácidos en solución o al estado solido).

1.-Agregar 1 ml de reactivo de Biuret a una pequeña porción de muestra colocada en cada tubo de ensaye 

2.-Observa la coloración que toma la muestra.

Si en la muestra hay proteínas se observara que la muestra toma una coloración violeta o morada (prueba positiva; si se queda de color azul , quiere decir que en la muestra no hay proteínas (prueba negativa)

los residuos contienen cobre, por lo que la parte liquida debe colocarse en un contenedor plástico para su tratamiento o almacenamiento temporal, hasta que pueda desecharse correctamente.

 REACCIÓN XANTOPROTEICA ( se utiliza para identificar proteínas que contienen aminoácidos aromativos).

1.-Agregar 1 ml de ácido nítrico concentrado a una pequeña porción de muestra colocada en un tubo de ensaye, calienta con precaución, sujetando el tubo con unas pinzas para tubo de ensaye y metiendo y sacando el tubo hacia donde no haya personas. puedes calentarlo en baño maría. Espera que enfrié.

2.-Deja resbalar por la paredes del tubo 1 ml de hidróxido de amonio ( no respires los vapores) sin agitar de tal forma que se formen en dos capas.

Si en la muestra hay proteínas se formara un anillo de color naranja entre las capas formadas por el ácido y el hidróxido (prueba positiva).

los residuos contienen un ácido y una base por lo que mezcla con mucho cuidado las dos capas para que ambas soluciones (ácido y base ) se neutralicen y puedas desecharlas.

REACCIONES PARA IDENTIFICAR LIPIDOS:

Se basa en que este colorante es soluble en grasas e insolubles en agua

1.-Colocar en los tubos pequeñas porciones de muestras, agregar a cada tubo 5 ,ml de agua de grifo.

2.-Agregar 3 gotas del reactivo Sudan lll 

3.-Agita enérgicamente y deja reposar por 5 minutos.

4.-Observa la formación de gotas de grasa coloreadas con Sudan lll de color naranja lo cual indica que el alimento contiene grasas ( prueba positiva)

Manteniendo las condiciones adecuadas de manejo no cabe esperar problemas ecológicos, por lo que  las sustancias pueden desecharse por el desagüe.

PRUEBA CON PAPEL ESTRAZA:

1.-Colocar pequeñas porciones de cada alimento en pedazos de papel de estraza.

2.-Dobla el papel sobre el alimento y presiona con los dedos .

3.-Observa si hay áreas del papel que se vean traslucidas y aparentemente húmedas lo cual indica que el alimento contiene grasas (prueba positiva).

RESULTADOS:

COMENTARIO:

La práctica es muy útil para ver todos los tipos de biomoléculas que existen en los alimentos que muchas veces forman parte de nuestra dieta diaria

TPT y TP

INTRODUCCIÓN: 

Los factores intrínsecos de la coagulación se activan en presencia de tromboplastina cálcica en plasma citratado; se mide el tiempo transcurrido después de la adición del cloruro calcio (CaCl₂) hasta la formación de coagulo de fibrina.

El tiempo de protombina (TP) o Tiempo de quick ha servido para determinar trastornos de coagulación, TP es la determinación más frecuente junto con la APTT.

MATERIAL:

• Baño maria
• Tubos de ensaye
• Centrifuga
• Pipeta de 200 microlitros
• Plasma

PROCEDIMIENTO:

1.  Introducir la muestra en la centrifuga a 3500  R.P.M.  durante 5 min. para obtener el plasma sanguíneo.
2. Separar 100 microlitros de plasma con ayuda de la pipeta  y depositar  en un tubo de ensaye. 
3. Seguidamente agregar 200 ML de reactivo de TP y tomar el tiempo con un valor de referencia de 13 segundos.
4. Separar 100 microlitros de plasma con ayuda de la pipeta  y depositar  en un tubo de ensaye.
5. Colocar 100 microlitros de reactivo de TPT en el mismo tubo.
6. Meter el tubo de ensaye a incubar en el baño maría durante 3 minutos
7. Al sacarlo inmediatamente agregar 100 microlitros de cloruro de calcio y medir el tiempo en que se forma el coagulo de fibrina con un valor de referencia de 37 segundos.
8.  
9.  

CONCLUSION:

 

Son pruebas bastante sencillas de realizar, sin embargo deben de realizarse con mucha precisión para poder obtener resultados de calidad y acertados.

Prueba de VIH

La prueba de VIH  es un ensayo individual para la detección de anticuerpos para el virus de la inmunodeficiencia humana tipo 1 y 2 en suero, plasma o sangre total.

PRINCIPIOS DEL PROCEDIMIENTO

Las proteínas recombinantes representando las regiones de las proteínas de la cubierta del VIH-1 Y VIH-2, la glicoproteína gp41, gp120 (VIH-1), y la glicoproteína gp36 (VIH-2) respectivamente so inmovilizadas en la región de la prueba de la tira de nitrocelulosa. Estas proteínas también se unen al aro coloidal  y se impregnan por debajo de la región de prueba del  cartucho. Una banda delgada de la  membrana de nitrocelulosa también se sensibiliza como una región control. 

Durante la prueba se aplican dos gotas de suero, plasma o sangra total al área de muestra, seguido de dos gotas de buffer de lavado y se deja que reaccionen. Loas anticuerpos IgG, específicos para las proteínas recombinantes del VIH-1 y VIH-2, reaccionaran con los antígenos unidos a las partículas de oro coloidal. El complejo partículas de oro coloidal-anticuerpos se mueve cromatográficamente a través de la membrana a las regiones de prueba y control de cartucho de prueba. 

Una reacción positiva se visualiza por una banda de color rosa/púrpura en la región de prueba del cartucho.

Una reacción negativa ocurre en la ausencia de anticuerpos inmunoglobulina humanos para VIH en la muestra analizada. Consecuentemente se desarrolla una banda no detectable visualmente en la región de prueba del cartucho. 

Un exceso de conjugado forma una segunda banda rosa/roja en la región control del cartucho. La aparición de esta banda indica el adecuado funcionamiento de los reactivos del equipo.

MATERIAL 

1.     Cartuchos de Prueba

2.      Reactivo de Lavado

3.      Pipetas desechables

4.      Inserto

5.      Cronómetro

6.      Equipo de Toma de muestra de sangre

ALMACENAMIENTO Y ESTABILIDAD

-    El equipo de prueba de VIH y la solución de lavado se puede almacenar de 275-300K (2-27°C).

-    Los componentes del equipo no se deben de utilizar después de su fecha de caducidad.

-    No fume, beba  o coma en áreas en las cueles se estén manipulando las muestras.

-    Deseche todas las muestras, pipetas y cartuchos utilizados ya que son capaces de transmitir infección. Los métodos de desecho de preferencia son esterilizando en autoclave a 121°C por un mínimo de 60min. O por incineración.

-    Cuando se elimine el buffer de lavado evite su contacto con algún ácido.

-    Todos los derrames se deben de limpiar completamente utilizando un desinfectante adecuado como el hipoclorito de sodio.

-    Utilice una pipeta desechable y un cartucho por cada muestra probada.

-    Los controles proporcionados se han certificado libres de virus. Como con todos los ensayos de screening cualquier resultado se debe de considerar presuntivo hasta que se haya realizado un ensayo confirmatorio de acuerdo a las prácticas locales o guías de la OMS.

RECOLECCION Y ALMACENAMIENTO DE LA MUSTRA

Se puede utilizar sangre total, suero o plasma.

·         Sangre Total: Si se usa una lanceta para punción capilar, las gotas de sangre se deben de tomar de la punta del dedo utilizada la pipeta proporcionada en el equipo y a partir de esta pipeta colocar las gotas en el cartucho. Las gotas de sangre no se deben colocar directamente de la punta del dedo al cartucho ya que su volumen puede variar.

NOTA IMPORTANTE: Las muestras de sangre total (MUESTRAS FRESCAS) se deben usar dentro de los diez minutos después de su toma para un funcionamiento óptimo del cartucho.

-      Si la muestra se ha comenzado a coagular no vuelva a mezclar antes de realizar la prueba. En tales casos, se debe de pipetear el suero claro del coágulo y utilizarlo para el análisis.

-      Si se ha utilizado una muestra de sangre con anticoagulante, la sangre total se puede colocar directamente en los cartuchos usando la pipeta proporcionada. Si la prueba no se va a llevar a cabo inmediatamente, las muestras se deben de almacenar de 275-281k (2-8°C) máximo tres días o preferentemente las muestras se deben de centrifugar y conservar el plasma para pruebas futuras.

·     Suero o Plasma: El suero o plasma se puede mantener de 275-281k (2-8°C) por tres días. Las muestras se deben de congelar para el caso de almacenamientos más prolongados (no más de cinco días). Evite repetir el congelamiento-descongelamiento de las muestras.

NOTA IMPORTANTE: De preferencia utilice muestras frescas para realizar la prueba.

PROCEDIMIENTO

Si cualquier muestra/reactivo se ha almacenado en refrigeración, permita que se atemperen 20min. A temperatura ambiente.Marque la prueba con la información apropiada del paciente.Utilizando una de las pipetas proporcionadas tome la muestra (suero/plasma/sangre total). Colocando la pipeta sobre el área de muestra adicione dos gotas de muestra (aproximadamente 60 ЧL) cuidadosamente.
Adicione dos gotas (aproximada- mente 60 ЧL) del reactivo de lavado al área de la muestra

Permita que transcurran exactamente 10min. Para que la reacción ocurra. El resultado se debe de leer exactamente al final de los 10min. Del tiempo de incubación. Los resultados son estables aproximadamente durante 5-10min.

INTERPRETACION DE RESULTADOS

Positivo: Una línea de cualquier intensidad en el área de prueba, una segunda línea en el área de control indica un resultado positivo.
 Negativo: Una línea en el área de control únicamente indica un resultado negativo.
 Invalido: Ausencia de una línea en el área de control. La prueba se debe de repetir con un cartucho nuevo independientemente de que aparezca un alinea en el área de prueba.

RESULTADOS

Puesto a que se observa una línea de color rasa/roja; tanto en la región de prueba como en la región de control en el cartucho, el resultado es positivo

LIMITACIONES

-      El procedimiento de prueba de VIH y la interpretación de los resultados se deben de seguir al pie de la letra para la detección de anticuerpos VIH en suero, plasma o sangre total.

-      La  prueba de VIH esta hecha para probar únicamente muestras sin diluir. Las muestras no se deben de diluir antes de realizar la prueba.

-      Los individuos inmunosuprimidos o inmunocomprometidos infectados con VIH-1 o VIH-2 pueden no producir anticuerpos para el virus. Probar con cualquier equipo diseñado para detectar anticuerpos puede dar resultados negativos y podrían no ser un método de prueba adecuado para teles pacientes.

-      Los niños pueden recibir anticuerpos de la madre infectada o puede ser que no produzcan anticuerpos en respuesta a una infección. Por lo tanto es necesario tener un cuidado extremo en la interpretación de sus resultados.

-      El SIDA y el ARC son síndromes clínicos y sus diagnósticos pueden establecerse clínicamente. Los resultados de  la  prueba de VIH por si solos no se pueden utilizar para diagnosticar SIDA. Un resultado negativo no excluye de la posibilidad de exposición al VIH o infección con VIH.

 
 

CONCLUSIÓN

La práctica es bastante sencilla, por así decirlo, sin embargo tiene una gran resposabilidad y debe de realizarse con extremo cuidado, al ser un virus tan riesgoso y de graves consecuencias se deben de tomar las mayores precauciones a la hora de su realización y llevarla acabo con la mayor seriedad posible

Prueba de Rumpel Lee

Prueba de lazo o torniquete

Introducción:

Consiste en someter el antebrazo del paciente a una presión intermedia entre la sistólica y la diastólica durante 5 minutos. Tras la retirada del manguito inflable del tensiómetro, como para medir la T.A.  y esperar a que la piel recupere su estado relajado se observa la zona presionada. El conteo de petequias producidas por la rotura capilar en un área de unos 10 cm² superior a 30 da positivo en el signo de Rumpel-Leede.

Normalmente no debe de producirse mas de 5 petequias por debajo de la comprensión, más de 10 petequias y sobre todo extendidas mas alla del cuarto superior del antebrazo es patológico.   

Tiene como finalidad determinar la fragilidad de las paredes capilares, estimar la tendencia a la hemorragia y ayuda a reconocer la trombocitopenia.

Valores Normales:

0-10 = 1+

10-20 = 2+

20-50 = 3+

50 o más petequias = 4+

Los valores aumentados pueden indicar coagulación intravascular difusa. disminución del fibrinogeno, disminución de la protombina, deficiencia del factor VII, trombocitopenia, tromboastenia, deficiencia de vitamina K. Y puede estar asociado a afecciones no relacionados con trastornos de coagulación como: escarlatina, hipertensión, diabetes, gripe, sarampión, escorbuto.

 

Resultados:

 

Aparecieron dos petequias en el área marcada, lo que está dentro de los valores normales, lo que indica que está en buen estado de salud 

 

Comentario:

 

La práctica nos resultó una experiencia un tanto divertida y fascinante, al ver como la mano de nuestra compañera perdía  color con rapidez, las petequias aparecieron un poco después de haber retirado la presión 

 

 

Retracción del coágulo

OBJETIVO:

Al término de la práctica el alumno será capaz de realizar e interpretar la prueba de R.C

INTRODUCCIÓN:

Puesto que el coágulo de fribrina encierra los elementos organizados (celulares) de la sangre (in vitro e in vivo) el volumen de los glóbulos rojos establece el límite inferior de la retracción de la fibrina. Por lo tanto, siendo normales los demás factores, el coágulo se retrae tanto más cuanto menor es el hematocrito. La retracción es directamente proporcional al número de plaquetas, e inversamente al hematocrito. Cuando las fibrinolinas son muy activas la fibrina puede disolverse casi tan rápidamente como se forma, y la retracción del coágulo se modifica en los transtornos de este tipo: choque, quemaduras etc.

Mide la cantidad de fibrina formada y su retracción; así como al número de función de las plaquetas, pues poseen una proteína similar a la actomiosina, que produce la retracción del coágulo.

MATERIAL:

• Tubos de ensaye para centrifugar
• Alambre de 1 mm. De grosor
• Baño maría de 37°c
• Equipo de venopunción

TECNICA:

1. Se pone en un tubo de centrifuga graduado de 5 ml de sangre venosa recién obtenida. Se lleva el alambre al fondo del tubo.
2. Se pone el tubo en el alambre, de un baño de agua a 37°c en donde se deja 1 hr. Después de la formación del coágulo sin tocarlo.
3. Se saca el alambre cuidadosamente y se deja escurrir dentro del tubo el coágulo unido al alambre durante 1 a 2 min.
4. Se lee el volumen del líquido que quedo en el tubo. El resultado es expresar como un porcentaje del volumen inicial de 5 ml.

VALORES NORMALES:

Entre 48 y 64 por ciento.

RESULTADO:

Muestra 1: 50% y muestra 2: 46%

COMENTARIO:

La prueba es relativamente sencilla, a excepción de que se emplea bastante tiempo en ella, pero en cuanto a cuestión de elaboración es muy fácil. El baño maría es el que se encarga de la mayor parte del trabajo, así que cuando se saca la muestra de ahí solo resta medir el líquido.