sábado, 4 de octubre de 2014

VDRL


Treponema pallidum, la bacteria que causa la sífilis, una enfermedad que generalmente se transmite por vía sexual.
Su diagnóstico puede ser serológico, con lo que se pueden determinar dos clases de anticuerpos:
1.    Tipo “cardiolipina”.- No treponema e inespecíficos
2.    Antitreponemas específicos
La prueba realizada Venereal Disease Research Laboratory VDRL se le conoce como una prueba para sífilis no-treponémica. Es parte de la exploración inicial de la sífilis e iniciar un tratamiento. Con  el método cualitativo empleando la  placa presenta floculación, si se presenta el caso se lleva a cabo el método cuantitativo con el o los sueros positivos.
También se emplea en el cuidado prenatal del embarazo, así como parte de los estudios de laboratorio prenatales.

MATERIAL:


o    Placa cóncava
o    Puntillas
o    Aguja No. 21 sin bisel
o    Cronómetro
o    Pipeta semiautomática
o    Microscopio
o    Antígeno VDRL y los Sueros de Controles (almacenados 2-8°C)


1. Depositar 0.05 ml. de suero problema en un anillo de la placa cóncava.
2. En otro anillo colocar una gota de suero control positivo y en el anillo siguiente una gota
de suero control negativo, extendiendo dentro de los mismos.
3. Añadir una gota del antígeno en suspensión previamente resuspendido en cada muestra
con la aguja N.21
4. Colocar la placa sobre un agitador mecánico a 180 rpm durante 4 min.
Las pruebas que se realizan en un clima extremadamente seco pueden evaporarse, por lo tanto
la paca se cubre con la tapa de una caja Petri humedecida.






Si el examen es positivo, el siguiente paso es confirmar los resultados con examen FTA-ABS, que es un examen más específico para la sífilis.
La capacidad del examen VDRL para detectar sífilis depende de la etapa de la enfermedad. La sensibilidad del examen para detectar la sífilis se acerca al 100% durante las etapas intermedias y es menos sensible durante las etapas más tempranas y tardías.
Las siguientes afecciones pueden provocar un examen falso positivo:
·  VIH
·  Enfermedad de Lyme
·  Ciertos tipos de neumonía
·  Malaria
·  Lupus eritematoso sistémico

Si las pruebas hubieran resultado positivas, se aplicaría el siguiente método

Método cuantitativo

1. Seleccionar los sueros positivos obtenidos en la prueba cualitativa.
2. Colocar en una gradilla 6 tubos y numerarlos.
3. Agregar a cada uno 0.5 ml. de solución salina al 9%.
4. Depositar 0.5 ml. de suero al tubo 1 y mezclar.
5. Pasar 0.5 ml. del tubo 1 al tubo 2 mezclar.
6. Pasar 0.5 ml. del tubo 2 al tubo 3 mezclar
7. Continuar con este proceso hasta el tubo 6.
8. Depositar 0.05 ml. de cada una de las diluciones sobre los diferentes anillos de la placa
cóncava.
9. Añadir una gota del antígeno en suspensión estabilizado (VDRL) utilizando la aguja No.21 sin
bisel a cada dilución.
10. Colocar la placa sobre un agitador mecánico a 180 rpm. Durante 4 min.
11. Leer al microscopio con objetivo seco débil 10x.
Resultados e interpretación
El título del suero problema será la última dilución que presente un resultado positivo. Ejemplo:
Si se presenta floculación hasta el tubo 3 – dilución 1:8, por lo tanto el título será 1:8.
Nota:
1.Sueros extremadamente turbios o hemolizados son insatisfactorios para la prueba.
2. Sueros débiles positivos y fuertes evidencias clínicas de la enfermedad es conveniente 
efectuar la prueba cuantitativa, ya que ocasionalmente pueden presentar el fenómeno de 
prozona.
3. Si la lectura del resultado no se realiza inmediatamente después de los 4 min. Puede secarse
la reacción y dificultad en la interpretación.
4. El antígeno en suspensión debe estar a temperatura ambiente antes de ser utilizado.

Conclusiones
Esta prueba cualitativa VDRL nos permite identificar a los pacientes con sífilis, enfermedad producida por la bacteria Treponema pallidum; se trata de una prueba rápida y certera que permite el inicio de un tratamiento eficaz evitando que avance y pueda ser controlada satisfactoriamente. En este caso, los resultados fueron negativos en ambas pruebas, por lo cual no hubo necesidad de utilizar el método cuntitativo.





sábado, 13 de septiembre de 2014

GRUPO SANGUINEO

GRUPO SANGUINEO

Objetivo:

El alumno determinara el grupo sanguíneo y el factor Rh de una muestra sanguínea utilizando los antisueros correspondientes y previa demostración correctamente.

Introducción:

Los grupos sanguíneos se han clasificado así por poseer características diferentes, estas características son los antígenos (aglutinogenos) y los anticuerpos (aglutininas) que son los responsables de las reacciones adversas inmunológicas en las transfusiones.

Material: 

  • Equipo de venopunción.
  • Placa de vidrio excavada. 
  • Aplicadores de madera.
  • Lanceta estéril.
  • 4 Tubos de ensaye (por muestra de sangre).
  • Gradilla.
  • Centrifuga.

Reactivos:

  • Anti-suero A
  • Anti-suero B
  • Anti-suero D
  • Solución isotónica de NaCl al 0.9%

Método en placa excavada:

  1. Se utiliza punción cutánea con la lanceta, se deshecha la primera gota y se deposita una gota en cada una de las excavaciones en forma horizontal o se marcan las letras A, B y Rh, y posteriormente se añade una gota de suero en donde le corresponda.
  2. Mezclar perfectamente con un aplicador diferente cada una de las preparaciones.
  3. Leer el resultado.

Método en tubo de ensaye:

  1. Se utiliza la punción venosa, se deposita 2 ml de sangre en un tubo de ensaye con 9.8 ml de solución isotónica de NaCl al 0.9%, para formar una suspensión de eritrocitos al 2%.
  2.  Marcar 3 tubos de ensaye con las letras A,B y Rh y depositar el suero que le corresponde.
  3. Añadir a los tubos una suspensión de eritrocitos al 2%.
  4. Centrifugar a 1000 r.p.m. durante 1 minuto.
  5. Sacar los tubos e inmediatamente ver si existe aglutinación.

Resultados:

Método en Placa excavada. "A" Rh Positivo.
Método en Tubo. "A" Rh Positivo.

Conclusión:

Es una práctica bastante sencilla y rápida de realizar pero de suma importancia, ya que es información vital que todo ser humano debería de saber y tener presente en caso de alguna emergencia de transfusión sanguínea.













sábado, 6 de septiembre de 2014

CONTEO DE LEUCOCITOS



Recuento diferencial de leucocitos 

 El recuento diferencial de leucocitos consiste en reconocer y valorar las proporciones relativas de las distintas variedades de glóbulos blancos que se observan en un frotis teñido de la sangre.
Al conocer la proporción de las células sanguíneas que están presentes en el torrente sanguíneo, cualquier trastorno patológico que altere el sistema hematopoyetico podría verse reflejado en un cambio de la proporción de una especie celular. Para el recuento diferencial se tiene que observar un mínimo de 100 leucocitos.
Hay carios métodos de recuento diferencial de leucocitos pero el mas utilizado es el de almena lineal. 

Material y reactivos

1.- Frotis sanguíneo teñido
2.- Microscopio.
3.- Aceite de inmercion
4.- Un contador de células

Procedimiento para la Tincion de Wright
 
  • Colocar el frotis secado al aire sobre una rejilla o cubeta de tinción con la sangre hacia arriba (ver figura 4). 
  • Cubrir completamente el portaobjetos o cubreobjetos con el colorante de Wright gota a gota. Dejarlo que permanezca en el frotis aproximadamente de 5-8 minutos, para fijar los glóbulos sanguíneos. El colorante deberá cubrir completamente el portaobjetos, pero no debe derramarse por los bordes. Deberá agregarse una cantidad adicional si éste se comienza a evaporar. 
  • Agregar directamente al colorante un volumen igual de amortiguador de Wright, para evitar la coloración débil. Esperar la formación de brillo metálico. Puede usarse de igual manera agua desionizada. Dejar actuar de 10-15 minutos. 
  • Lavar con agua en el chorro cuidadosamente hasta que la extensión presente un aspecto rosado al examinarlo a simple vista. 
  • Limpiar el dorso del portaobjetos con una gasa o algodón humedecido en alcohol para eliminar cualquier resto de colorante. 
  • Secar al aire y observar con el microscopio con el objetivo de inmersión. 

Procedimiento para el recuento diferencial de leucocitos 

1.- Coloca el frotis en el microscopio y se enfoca.
2.-Se le agrega una gota de aceite de inmersión  y se observa con el objetivo de 100x.
3.-Si el recuento se hace en linea se empieza en un borde del frotis hasta el otro borde en linea paralela hasta contar 100 leucocitos.
4.- Se van contando los mononucleares (monocitos y linfocitos) y los polimorfo nucleares (neutrofilos, eosinofilos y basofilos) según su morfología.
5.- Se reporta el % (valor relativo) o en valor absoluto (mm3)

        

Adultos
Niños
Linfocitos
20-55%
20-50%
Monocitos
2-6%
0-9%
Eosinofilos
1-5%
0-8%
Basófilos
0-1%
0-1%
Neutrófilos
45-70%
20-60%
Bandas
0-5%
1-6%

Resultados 

Muestra 1: 
Leucocitos: 7,850 mm3
Monocitos: 3
Linfocitos: 39
Basófilos: 0
Eosinófilos: 1
Neutrófilos: 57

Muestra 2:
Leucocitos: 7,000 mm3 
Monocitos: 3
Linfocitos: 35
Basófilos: 0
Eosinófilos: 7
Neutrófilos: 56







 

viernes, 29 de agosto de 2014

CONTEO DE LEUCOCITOS

INTRODUCCIÓN
 
El conteo de los elementos formes de la sangre es indispensable para la hematología diagnostica. Para contar lo leucocitos se diluye una cantidad exacta de sangre con liquido de Turk, que es una solución hipotónica que destruye a los eritrocitos  y conserva la estructura de los leucocitos, esta mezcla se coloca en una cámara de Neubauer Y se cuenta el número de células en los cuadros indicados.

MATERIAL Y REACTIVOS 
1.   Pipeta de thoma para glóbulos blancos
2.   Una cámara de Neubauer
3.   Un microscopio
4.   Solución de Turk
5.   Gasas
6.    Sangre venosa con EDTA

PROCEDIMIENTO
1.- Obtener sangre venosa con EDTA y mezclar perfectamente
2. Aspirar sangre con la pipeta.de thoma hasta la marca 0.5
 3.- Limpiar la parte externa de la pipeta con gasa o papel absorbente.
4. Aspirar liquido de Turk hasta la marca 11

 5. Retirar la boquilla de la pipeta y sellar los extremos con papel parafilm
 6. Agitar la pipeta de thoma de 3 a 5 min. y preparar la cámara con el cubrehematímetro.
7. Descartar las primeras 3 gotas y llenar la cámara por capilaridad por uno de los bordes del cubrehematímetro, sin que se formen burbujas o sobrepasen los canales de la cámara.
 8. Dejar reposar de 3 o 5 mín. la cámara con la muestra.
9. Enfocar la cámara en eI microscopio y contar los leucocitos con el objetivo seco débil en 64 cuadros de las cuatro cuadriculas de los extremos
10.- Multiplicar el número de leucocitos contados por 50.

VALOR DE REFERENCIA 5 000 a 10 000/mm3
 
RESULTADOS

Muestra 1 (Manuel): 5,900 mm3

Muestra 2 (Omar): 8,400 mm3

COMENTARIO
Con ésta práctica pudimos reafirmar un conocimiento ya aprendido en los semestres pasados además de practicar la técnica una vez más. Los resultados salieron dentro de los valores normales, lo que significa que ninguno de los dos sujetos presenta problemas de leucopenia o leucocitosis.