CONTEO DE LEUCOCITOS

Recuento diferencial de leucocitos 

 El recuento diferencial de leucocitos consiste en reconocer y valorar las proporciones relativas de las distintas variedades de glóbulos blancos que se observan en un frotis teñido de la sangre.

Al conocer la proporción de las células sanguíneas que están presentes en el torrente sanguíneo, cualquier trastorno patológico que altere el sistema hematopoyetico podría verse reflejado en un cambio de la proporción de una especie celular. Para el recuento diferencial se tiene que observar un mínimo de 100 leucocitos.

Hay carios métodos de recuento diferencial de leucocitos pero el mas utilizado es el de almena lineal. 

Material y reactivos

1.- Frotis sanguíneo teñido

2.- Microscopio.

3.- Aceite de inmercion

4.- Un contador de células

Procedimiento para la Tincion de Wright

 

• Colocar el frotis secado al aire sobre una rejilla o cubeta de tinción con la sangre hacia arriba (ver figura 4). 
• Cubrir completamente el portaobjetos o cubreobjetos con el colorante de Wright gota a gota. Dejarlo que permanezca en el frotis aproximadamente de 5-8 minutos, para fijar los glóbulos sanguíneos. El colorante deberá cubrir completamente el portaobjetos, pero no debe derramarse por los bordes. Deberá agregarse una cantidad adicional si éste se comienza a evaporar. 
• Agregar directamente al colorante un volumen igual de amortiguador de Wright, para evitar la coloración débil. Esperar la formación de brillo metálico. Puede usarse de igual manera agua desionizada. Dejar actuar de 10-15 minutos. 
• Lavar con agua en el chorro cuidadosamente hasta que la extensión presente un aspecto rosado al examinarlo a simple vista. 
• Limpiar el dorso del portaobjetos con una gasa o algodón humedecido en alcohol para eliminar cualquier resto de colorante. 
• Secar al aire y observar con el microscopio con el objetivo de inmersión. 

Procedimiento para el recuento diferencial de leucocitos 

1.- Coloca el frotis en el microscopio y se enfoca.

2.-Se le agrega una gota de aceite de inmersión  y se observa con el objetivo de 100x.

3.-Si el recuento se hace en linea se empieza en un borde del frotis hasta el otro borde en linea paralela hasta contar 100 leucocitos.

4.- Se van contando los mononucleares (monocitos y linfocitos) y los polimorfo nucleares (neutrofilos, eosinofilos y basofilos) según su morfología.

5.- Se reporta el % (valor relativo) o en valor absoluto (mm3)

        

	Adultos	Niños
Linfocitos	20-55%	20-50%
Monocitos	2-6%	0-9%
Eosinofilos	1-5%	0-8%
Basófilos	0-1%	0-1%
Neutrófilos	45-70%	20-60%
Bandas	0-5%	1-6%

Resultados 

Muestra 1: 

Leucocitos: 7,850 mm3

Monocitos: 3

Linfocitos: 39

Basófilos: 0

Eosinófilos: 1

Neutrófilos: 57

Muestra 2:

Leucocitos: 7,000 mm3 

Monocitos: 3

Linfocitos: 35

Basófilos: 0

Eosinófilos: 7

Neutrófilos: 56

 

CONTEO DE LEUCOCITOS

INTRODUCCIÓN
 

El conteo de los elementos formes de la sangre es indispensable para la hematología diagnostica. Para contar lo leucocitos se diluye una cantidad exacta de sangre con liquido de Turk, que es una solución hipotónica que destruye a los eritrocitos  y conserva la estructura de los leucocitos, esta mezcla se coloca en una cámara de Neubauer Y se cuenta el número de células en los cuadros indicados.

MATERIAL Y REACTIVOS 

1.   Pipeta de thoma para glóbulos blancos

2.   Una cámara de Neubauer

3.   Un microscopio

4.   Solución de Turk

5.   Gasas

6.    Sangre venosa con EDTA

PROCEDIMIENTO

1.- Obtener sangre venosa con EDTA y mezclar perfectamente

2. Aspirar sangre con la pipeta.de thoma hasta la marca 0.5

 3.- Limpiar la parte externa de la pipeta con gasa o papel absorbente.

4. Aspirar liquido de Turk hasta la marca 11

 5. Retirar la boquilla de la pipeta y sellar los extremos con papel parafilm

 6. Agitar la pipeta de thoma de 3 a 5 min. y preparar la cámara con el cubrehematímetro.

7. Descartar las primeras 3 gotas y llenar la cámara por capilaridad por uno de los bordes del cubrehematímetro, sin que se formen burbujas o sobrepasen los canales de la cámara.

 8. Dejar reposar de 3 o 5 mín. la cámara con la muestra.

9. Enfocar la cámara en eI microscopio y contar los leucocitos con el objetivo seco débil en 64 cuadros de las cuatro cuadriculas de los extremos

10.- Multiplicar el número de leucocitos contados por 50.

VALOR DE REFERENCIA 5 000 a 10 000/mm3
 

RESULTADOS

Muestra 1 (Manuel): 5,900 mm³

Muestra 2 (Omar): 8,400 mm³

COMENTARIO

Con ésta práctica pudimos reafirmar un conocimiento ya aprendido en los semestres pasados además de practicar la técnica una vez más. Los resultados salieron dentro de los valores normales, lo que significa que ninguno de los dos sujetos presenta problemas de leucopenia o leucocitosis. 

Conteo de Reticulocitos

Los reticulocitos son eritrocitos jovenes y contienen en su interior RNA-ribosomal el cual puede observarse en forma de red mediante de un colorante supravital. Cuando en la medula osea aumenta la eritropoyesis aumenta también el número de reticulocitos que salen hacia la circulación.

Material:

• Colorante de azul de cresilo o nuevo azul de metileno
• Tubos de ensayo
• Portaobjetos
• Pipetas pasteur
• Sangre con EDTA

Procedimiento:

1.-Se ponen cinco gotas de sangre en un tubo de ensayo
2.-Se le agregan cinco gotas del colorante y se mezcla
3.-Se incuba el tubo de ensaye a 37°C por 15 min en el baño maria
4.-Se realiza un frotis y se deja secar a temperatura ambiente
5.-Se observa con el objetivo 100X

Resulttado:

Muestra 1: 0.5%
Muestra 2: 0.7%

Comentario:

Es una prueba relativamente facil de realizar aunque si es un poco cansado en la vista al momento de contar pero en otras palabras es una prueba útil y eficaz

Indices Eritrocitarios

Para poder determinar si la muestra estaba dentro de los valores normales de los indices eritrocitarios tuvimos que realizar tres pruebas diferentes: Conteo de eritrocitos, Determinación de Hemoglobina y Hematocrito

Hb:

El estandar fue de 0.340 y la absorbancia de la muestra fue de 0.353, por lo tanto, la hemoglobina fue de 15.574 g/dl osea un 37.6%

Conteo de eritrocitos:

El resultado del conteo de eritrocitos fue de 3,950,000 eritrocitos.

Hematocrito:

El resultado del Hto fue de 43.5%



Los indices fueron:

H.C.M. : 39.48

CHCM: 35.4%

VCCM: 111.5 u cubicas


Observaciones: Los resultados del VCCM estuvieron un poco por encima de los normales, sin embargo, el resto de los examenes resulto estar dentro de los parámetros esperados. Esto nos ayuda a confirmar los niveles básicos sanguíneos en una persona y pueden ayudarnos a identificar si hay anemias en el paciente, y si las hay, de que tipo.

Hematocrito

El hematocrito (Hto) es uno de los métodos más exactos para determinar el volumen de eritrocitos en sangre expresado en gramos por decilitro. Existen dos formas de realizar un hematocrito, el método por tubo de Wintrobe y el método por tubo capilar.

Método de Wintrobe:

Materiales

-Tubo de Wintrobe
-Pipeta Pasteur

Procedimiento:

1.- Se obtiene una muestra de sangre en un tubo morado
2.-Con la pipeta pasteur, se llena el tubo de Wintrobe hasta la marca 10, cuidandose de que no haya ninguna burbuja
3.-Se mete a la centrifuga a 3000 rpm por media hora.
4.-Al terminar el tiempo se realiza la lectura

Resultado: 47%

Conclusión: La muestra fue de una mujer por lo tanto se encuentra dentro de los valores normales

Método de tubo capilar:

Materiales:

 -Tubo capilar

Procedimiento:

1.-Se obtiene sangre por medio de una punción cutánea (también puede ser utilizada sangre venosa de un tubo morado)
2.-Se coloca el extremo coloreado del tubo capilar al borde de la sangre y se rota suavemente para que se vaya llenando.
3.-Se llena el tubo a 2 terceras partes de su capacidad.
4.-Se sella el tubo, ya sea con plastilina o quemando el extremo opuesto del capilar
5.-Se mete a la microcentrífuga a 1000 rpm por 10 minutos.
6.-Al terminar el tiempo, se coloca el tubo sobre la escuadra de medición y se realiza la lectura.

Resultado: 47%

Conclusión: La muestra fue la misma para ambos exámenes y el resultado fue el mismo al de la prueba de macrohematocrito (Método del tubo de Wintrobe) por lo que confirmamos que ambos resultados eran correctos.

Determinación de Hb

DETERMINACIÓN DE LA HEMOGLOBINA

Objetivo:

Determinar cuántos gr de hemoglobina (Ha) hay en toda la sangre circulante, para tener un diagnóstico clínico ya que se pueden variar diversas enfermedades debido a un valor anormal de Hemoglobina.

Fundamento:

La hemoglobina es una proteína conjugada que sirve para el transporte de oxígeno y dióxido de carbono. La masa total de eritrocitos de un adulto contiene unos 600gr. De hemoglobina capaces de transportar 800ml de oxígeno.

Una molécula de hemoglobina consta de 2 pares de cadenas polipépticas (unión de aminoácidos) (globina) y 4 grupos proteicos HEM que contienen cada uno un átomo de hierro en estado ferroso. Cada punto HEM se localiza en una zona determinada de una de las cadenas de polipépticos. Localizando cerca la superficie de la molécula, el HEM se combina de forma reversible con una molécula de oxígeno y dióxido de carbono. Este grupo HEM es el responsable del color rojo de la hemoglobina (Hb).

La parte proteica o globina tiene 4 cadenas polipeptídicas que se denominan con las letras α, β, γ, δ. Existe una cadena más la ε que está presente durante los 3 primeros meses de vida se diferencian unas de las otras en el numero o posición (de los aminoácidos de los que están compuestas). Por lo tanto existen varios tipos de Hb. en el ser humano que se pueden encontrar (Hb A, Hb A1, Hb F, Hb Gower)

Las distintas Hb tienen espectros de absorción características a las que determina en un espectrofotómetro. La identificación de diferentes formas de la Hb con la determinación de sus espectros de absorción puede hacerse de una manera sencilla 

Material y Equipo:

·         Un espectrofotómetro.

·          Una pipeta de vidrio graduada de 5 ml

·          Tubos de ensayo.

·         Cubetas cuadradas.

·         Gradilla

·         Gasa

Reactivos:

·         Reactivo Drabkin

Técnica:

1.-En un tubo de 13 x 100 colocar exactamente 5 ml de reactivo de Drabkin, marcarlo como problema (P).

2.-Obtener 5 ml de sangre venosa con anticoagulante (EDTA).

3.-Con una pipeta automática o pipeta de Shali se toma exactamente 0,02 ml (20 µL) de sangre total, limpiar luego la punta de la pipeta.

4.-La sangre tomada del tubo con EDTA se vierte en el tubo que contenga reactivo de Drabkin. Se enjuaga 3 veces y se mezcla.

5.- Mezcle la solución de Drabkin con la sangre por inversión y con mucha precaución

6.-Dejar en reposo de 5 a 10 minutos para que se  efectúe la reacción.

7.-Después de ese tiempo se llenan las cubetas y se procede la lectura.

8.-Leer en absorbancia con filtro verde a 540 nm llevando a cero el fotómetro con agua destilada / Drabkin.

Resultado:

El espectrofotómetro nos dio como resultado .353 y después de hacer los cálculos correspondientes el resultado fue de 15.5. La muestra fue de una mujer por lo cual se encuentra dentro de los valores normales.

Observaciones:

Este es uno de los análisis más fáciles de realizar ya que la máquina hace todo por nosotros

Conclusiones:

Existen varios factores para determinar cuándo y con qué frecuencia se pueden realizar los exámenes. Se puede sugerir un examen o llegar a ser necesario cuando aparecen ciertos signos o síntomas.

Técnica de Willis

OBJETIVO: Aprender a realizar diferente métodos para la identificación y estudio de los parásitos en este caso la búsqueda de huevos y quistes.

FUNDAMENTO: Willis en 1921, describe este método basado en la propiedad que tienen las soluciones de densidad mayor de hacer flotar objetos menos densos. Este método está recomendado específicamente para la investigación de protozoarios y helmintos, consiste en la preparar la materia fecal con solución saturada de cloruro de sodio.

Es un método de concentración por flotación simple. Consiste en preparar el material fecal con Solución saturada de ClNa.

Utilidad:

Recomendado especialmente para la investigación de geohelmintos.
Los Huevos de helmintos de peso específico menor que la solución saturada de NaCl tienden a subir y adherirse a una lámina colocada en contacto con la superficie del líquido.
Este método es de alta sensibilidad en el diagnóstico de huevos livianos de helmintos: A. duodenale, N. americanus, A. lumbricoides, H. nana.
Limitaciones
los huevos y quistes de peso específico menor que la solución saturada de cloruro de sodio tienden a adherirse a un cubreobjetos colocado

MATERIAL:

·         Vaso de precipitado

·         Embudo

·         Tubo de ensaye

·         Portaobjetos

·         Cubreobjetos

·         abate lenguas

REACTIVOS

·         Sol. Saturada de NaCl

·         Sol. De yodo lugol

PROCEDIMIENTO:

1.- Tomar aproximadamente1gr de heces fecales con un abate lenguas.

2.- Colocar la muestra en un vaso de precipitado y mezclar con 10ml de solución saturada de cloruro de sodio.

3.-En un tubo de ensaye filtre la mezclar con una gasa, llenando completamente el tubo.

4.-Coloque un portaobjetos sobre el tubo de manera que el líquido haga contacto con el portaobjetos.

5.-Esperamos de 5 a 10 minutos.

6.-Los quistes o huevos flotaran y quedaran adheridos a la cara del portaobjetos que está en contacto con la mezcla.

7.-Colocar una gota de yodo lugol en el porta objetos y colocar el cubreobjetos.

8.-Examinar la muestra al microscopio con el objetivo 40x, buscamos quistes o huevecillos de parásitos.

9.-Reportar los resultados   

OBSERVACIONES

En esta práctica realizamos dos muestras diferentes, en la primera no encontramos nada interesante solo logramos ver restos de alimentos y en la segunda un campo de quistes en especial de Entamoeba histolytica.