La prueba de VIH es un ensayo individual para la detección de
anticuerpos para el virus de la inmunodeficiencia humana tipo 1 y 2 en suero,
plasma o sangre total.
PRINCIPIOS DEL
PROCEDIMIENTO
Las proteínas recombinantes
representando las regiones de las proteínas de la cubierta del VIH-1 Y VIH-2,
la glicoproteína gp41, gp120 (VIH-1), y la glicoproteína gp36 (VIH-2)
respectivamente so inmovilizadas en la región de la prueba de la tira de
nitrocelulosa. Estas proteínas también se unen al aro coloidal y se impregnan por debajo de la región de
prueba del cartucho. Una banda delgada
de la membrana de nitrocelulosa también
se sensibiliza como una región control.
Durante la prueba se aplican dos
gotas de suero, plasma o sangra total al área de muestra, seguido de dos gotas
de buffer de lavado y se deja que reaccionen. Loas anticuerpos IgG, específicos
para las proteínas recombinantes del VIH-1 y VIH-2, reaccionaran con los
antígenos unidos a las partículas de oro coloidal. El complejo partículas de
oro coloidal-anticuerpos se mueve cromatográficamente a través de la membrana a
las regiones de prueba y control de cartucho de prueba.
Una reacción positiva se visualiza
por una banda de color rosa/púrpura en la región de prueba del cartucho.
Una reacción negativa ocurre en la
ausencia de anticuerpos inmunoglobulina humanos para VIH en la muestra
analizada. Consecuentemente se desarrolla una banda no detectable visualmente
en la región de prueba del cartucho.
Un exceso de conjugado forma una
segunda banda rosa/roja en la región control del cartucho. La aparición de esta
banda indica el adecuado funcionamiento de los reactivos del equipo.
MATERIAL
1. Cartuchos de Prueba
2. Reactivo de Lavado
3. Pipetas desechables
4. Inserto
5. Cronómetro
6. Equipo de Toma de muestra de sangre
ALMACENAMIENTO Y
ESTABILIDAD
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El
equipo de prueba de VIH y la solución de lavado se puede almacenar de 275-300K
(2-27°C).
-
Los
componentes del equipo no se deben de utilizar después de su fecha de
caducidad.
-
No
fume, beba o coma en áreas en las cueles
se estén manipulando las muestras.
-
Deseche
todas las muestras, pipetas y cartuchos utilizados ya que son capaces de
transmitir infección. Los métodos de desecho de preferencia son esterilizando
en autoclave a 121°C por un mínimo de 60min. O por incineración.
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Cuando
se elimine el buffer de lavado evite su contacto con algún ácido.
-
Todos
los derrames se deben de limpiar completamente utilizando un desinfectante
adecuado como el hipoclorito de sodio.
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Utilice
una pipeta desechable y un cartucho por cada muestra probada.
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Los
controles proporcionados se han certificado libres de virus. Como con todos los
ensayos de screening cualquier resultado se debe de considerar presuntivo hasta
que se haya realizado un ensayo confirmatorio de acuerdo a las prácticas
locales o guías de la OMS.
RECOLECCION Y
ALMACENAMIENTO DE LA MUSTRA
Se puede utilizar sangre total, suero
o plasma.
·
Sangre Total: Si se usa una lanceta para punción
capilar, las gotas de sangre se deben de tomar de la punta del dedo utilizada
la pipeta proporcionada en el equipo y a partir de esta pipeta colocar las
gotas en el cartucho. Las gotas de sangre no se deben colocar directamente de
la punta del dedo al cartucho ya que su volumen puede variar.
NOTA IMPORTANTE: Las muestras de sangre total
(MUESTRAS FRESCAS) se deben usar dentro de los diez minutos después de su toma
para un funcionamiento óptimo del cartucho.
-
Si
la muestra se ha comenzado a coagular no vuelva a mezclar antes de realizar la
prueba. En tales casos, se debe de pipetear el suero claro del coágulo y
utilizarlo para el análisis.
-
Si
se ha utilizado una muestra de sangre con anticoagulante, la sangre total se
puede colocar directamente en los cartuchos usando la pipeta proporcionada. Si
la prueba no se va a llevar a cabo inmediatamente, las muestras se deben de
almacenar de 275-281k (2-8°C) máximo tres días o preferentemente las muestras
se deben de centrifugar y conservar el plasma para pruebas futuras.
· Suero o Plasma: El suero o plasma se puede mantener
de 275-281k (2-8°C) por tres días. Las muestras se deben de congelar para el
caso de almacenamientos más prolongados (no más de cinco días). Evite repetir
el congelamiento-descongelamiento de las muestras.
NOTA IMPORTANTE: De preferencia utilice muestras
frescas para realizar la prueba.
PROCEDIMIENTO
Si
cualquier muestra/reactivo se ha almacenado en refrigeración, permita que se
atemperen 20min. A temperatura ambiente.Marque
la prueba con la información apropiada del paciente.Utilizando
una de las pipetas proporcionadas tome la muestra (suero/plasma/sangre total). Colocando
la pipeta sobre el área de muestra adicione dos gotas de muestra
(aproximadamente 60 ЧL) cuidadosamente.
Adicione
dos gotas (aproximada- mente 60 ЧL) del reactivo de lavado al área de la
muestra
Permita
que transcurran exactamente 10min. Para que la reacción ocurra. El resultado se
debe de leer exactamente al final de los 10min. Del tiempo de incubación. Los
resultados son estables aproximadamente durante 5-10min.
INTERPRETACION DE RESULTADOS
Positivo: Una línea de cualquier intensidad en
el área de prueba, una segunda línea en el área de control indica un resultado
positivo.
Negativo: Una línea en el área de control
únicamente indica un resultado negativo.
Invalido: Ausencia de una línea en el área de
control. La prueba se debe de repetir con un cartucho nuevo independientemente
de que aparezca un alinea en el área de prueba.
RESULTADOS
Puesto a que se observa una línea de
color rasa/roja; tanto en la región de prueba como en la región de control en
el cartucho, el resultado es positivo
LIMITACIONES
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El
procedimiento de prueba de VIH y la interpretación de los resultados se deben
de seguir al pie de la letra para la detección de anticuerpos VIH en suero,
plasma o sangre total.
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La prueba de VIH esta hecha para probar
únicamente muestras sin diluir. Las muestras no se deben de diluir antes de
realizar la prueba.
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Los
individuos inmunosuprimidos o inmunocomprometidos infectados con VIH-1 o VIH-2
pueden no producir anticuerpos para el virus. Probar con cualquier equipo
diseñado para detectar anticuerpos puede dar resultados negativos y podrían no
ser un método de prueba adecuado para teles pacientes.
-
Los
niños pueden recibir anticuerpos de la madre infectada o puede ser que no
produzcan anticuerpos en respuesta a una infección. Por lo tanto es necesario
tener un cuidado extremo en la interpretación de sus resultados.
-
El
SIDA y el ARC son síndromes clínicos y sus diagnósticos pueden establecerse
clínicamente. Los resultados de la prueba de VIH por si solos no se pueden
utilizar para diagnosticar SIDA. Un resultado negativo no excluye de la
posibilidad de exposición al VIH o infección con VIH.
CONCLUSIÓN
La práctica es bastante sencilla, por así decirlo, sin embargo tiene una gran resposabilidad y debe de realizarse con extremo cuidado, al ser un virus tan riesgoso y de graves consecuencias se deben de tomar las mayores precauciones a la hora de su realización y llevarla acabo con la mayor seriedad posible
